外泌体作为细胞分泌的 “信息载体”，通过 “内吞 - 融合 - 外排” 的调控过程形成，以 30~150 nm 的单层膜结构承载母细胞的蛋白质、核酸、脂质等关键生物分子。无论是干细胞、免疫细胞，还是肿瘤细胞，在正常与病理状态下均会分泌外泌体 —— 它们不仅能重塑细胞外基质微环境，还能将 “母细胞信号” 传递给受体细胞，直接影响病理或生理功能的走向。更重要的是，外泌体的分子组成精准反映母细胞的表型，已成为肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病的核心生物标志物 —— 早期检测外泌体不仅能显著提升患者生存率，还能避免过度诊断与治疗的风险，为疾病诊疗开辟了全新路径。
一、传统外泌体检测的局限：灵敏度与特异性的双重瓶颈
尽管外泌体的临床价值已得到公认，但传统检测方法仍难以满足 “早期、精准” 的诊断需求。目前常用的检测技术各有短板：
核酸层面：PCR 技术虽能检测外泌体中的 miRNA 等核酸，但需先提取核酸，操作繁琐且易受样本中杂质干扰，对低丰度外泌体的检出率不足； 蛋白层面：Western blot（WB）需大量样本且无法定量，ELISA 虽能定量但灵敏度有限（检测限多在 ng 级），难以捕捉早期疾病中微量的外泌体变化； 物理 / 光学层面：表面等离子体共振（SPR）、表面增强拉曼散射（SERS）虽灵敏度高，但依赖昂贵仪器；微流体技术虽能实现微型化检测，却受限于复杂基质（如血液中的蛋白、脂质）的干扰。展开剩余77%临床样本中外泌体丰度低、基质成分复杂的特点，使得传统方法难以兼顾 “高灵敏度、高特异性、低成本”，亟需更优的检测技术突破瓶颈。
二、核酸适配体：外泌体精准识别的 “新型分子工具”
核酸适配体的出现，为外泌体检测提供了理想的识别元件。这类通过SELEX 技术（指数富集的配体系统进化技术） 体外筛选获得的单链 DNA（ssDNA）或 RNA，能折叠成 G - 四链体、发夹、凸环等三维结构，以极高的亲和力（解离常数 KD 多在 nM~pM 级）与特异性结合靶标，且相比传统抗体具有显著优势：
可设计性强：能通过化学合成精准控制序列，批次间差异小，避免抗体生产中的 “批间不均” 问题； 易修饰性：可便捷连接荧光基团、酶标记、电化学探针等功能模块，直接构建检测传感器； 生物安全性高：低毒性、低免疫原性，不会引发机体免疫反应，适合体内外检测场景； 稳定性好：经 2'- 氟修饰、硫代磷酸骨架修饰后，能抵抗核酸酶降解，延长体外保存与体内作用时间。基于这些优势，适配体已被用于构建多种外泌体传感器：
电化学传感器：通过适配体与外泌体结合后电信号的变化实现定量，检测限可低至 10³ 个 /mL，适用于血液样本快速分析； 荧光传感器：利用适配体结合外泌体后荧光共振能量转移（FRET）的变化，实现可视化检测，已成功用于肝癌细胞来源外泌体的定性筛查； 比色传感器：结合金纳米颗粒的聚集效应，通过溶液颜色变化（红色→蓝色）实现肉眼判读，无需仪器辅助，适合基层医疗机构使用。目前，这类传感器已在肝癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等疾病的外泌体检测中验证有效性，为早期诊断提供了可靠工具。
三、外泌体适配体的筛选技术：从固定化到非固定化的策略创新
筛选高效稳定的适配体是技术落地的核心前提。针对外泌体的特性，目前主流筛选技术可分为 “固定化” 与 “非固定化” 两大类，各有适配场景：
1. 固定化筛选：易分离，适合常规场景
固定化策略通过将外泌体、其表面特征蛋白或核酸文库偶联至固相载体（如磁珠、硝酸纤维素膜），实现 “结合 - 分离” 的高效操作，核心优势是降低筛选难度、提高富集效率。
磁珠 - SELEX（MB-SELEX）：将外泌体偶联至磁珠表面，与核酸文库孵育后通过磁场分离复合物，反复迭代富集特异性适配体。操作简单、试剂易得，是目前最常用的筛选方法，已用于靶向 CD63（外泌体通用标志物）适配体的筛选； 硝酸纤维素膜 - SELEX（NC-SELEX）：利用膜对大分子的吸附作用固定外泌体，冲洗去除未结合核酸后提取适配体。成本极低，适合实验室初步筛选，但需注意膜的非特异性吸附问题。不过，固定化可能改变外泌体表面蛋白的天然构象，导致筛选出的适配体在生理环境下结合活性下降，这是该策略的主要局限。
2. 非固定化筛选：模拟生理环境，提升适配体稳定性
非固定化策略直接在溶液中完成筛选，能最大程度保留外泌体与靶标的天然构象，筛选出的适配体更贴近实际应用场景：
微流控 - SELEX（M-SELEX）：在微流控芯片的微通道内，通过流体力学与电场控制实现外泌体与核酸的精准结合、分离。试剂用量仅为传统方法的 1/10，筛选周期缩短至 1~2 周，适合微量外泌体（如单细胞分泌的外泌体）的筛选； 细胞 - SELEX：以分泌特定外泌体的完整细胞为靶标，无需纯化外泌体，直接筛选识别 “天然状态外泌体” 的适配体。已成功筛选出靶向肝癌细胞（HepG2）外泌体的适配体，避免了纯化过程导致的靶点变性； 毛细管电泳 - SELEX（CE-SELEX）：利用毛细管电泳的高分辨率，分离 “适配体 - 外泌体复合物” 与游离核酸，能精准筛选出高亲和力适配体（KD 可达 pM 级），但样本处理量小，适合高灵敏度需求的场景。四、前沿趋势与挑战：适配体技术的未来突破方向
尽管适配体在体外泌体检测中展现出巨大潜力，仍面临三大核心挑战：
外泌体异质性干扰：同一疾病的外泌体存在亚型差异，单一靶点适配体可能遗漏致病亚型，需开发 “多靶点适配体组合库” 或 “广谱识别适配体”； 体内稳定性不足：未修饰的适配体在体内易被核酸酶降解，需进一步优化化学修饰策略（如引入锁核酸 LNA），延长半衰期； 复杂基质抗干扰能力：血液、脑脊液中的蛋白、脂质易与适配体非特异性结合，需通过序列设计（如增加疏水性片段）减少干扰。未来，随着高通量测序（NGS） 用于筛选库的深度分析（快速识别高活性适配体序列）、计算机辅助设计（模拟适配体 - 靶标结合构象，缩短筛选周期）、多技术联用（如微流控 - CE-SELEX 联用）的发展，适配体技术将更高效、精准，推动外泌体检测从 “实验室研究” 走向 “临床常规检测”。泰克生物聚焦核酸适配体的发现与应用，依托高效 SELEX 技术平台及创新筛选策略，开发靶向外泌体等疾病标志物的适配体工具，为疾病早期诊断、精准医疗及生物传感技术突破提供可靠技术支撑。
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